技術(shù)文章
Technical articles(1)近半個(gè)世紀(jì)前,Kivy和Dember等人證明大鼠能辨別T-形迷宮(T-maze)兩臂顏色的變化。他們發(fā)現(xiàn),將雄性大鼠置于T-形迷宮的主干臂 15-30min,讓其能看見(jiàn)、但不能進(jìn)入黑白兩臂。然后,改變其中一個(gè)臂的顏色,使兩臂同為黑色或白色。讓大鼠自由選擇T-形臂。結(jié)果顯示,大鼠總是選擇改變了顏色的那個(gè)臂(新異臂)。這一過(guò)程要依靠動(dòng)物的記憶來(lái)完成。由此發(fā)展而成的T-形迷宮實(shí)驗(yàn)成為目前用于評(píng)價(jià)空間記憶的常用的動(dòng)物模型之一。當(dāng)然,現(xiàn)在的T-形迷宮使用的是食物而不是臂的顏色作為動(dòng)物探究的動(dòng)力。通常用這一模型來(lái)研究動(dòng)物的空間工作記憶(spatial working memory),即測(cè)定動(dòng)物只在當(dāng)前操作期間有用的信息。經(jīng)改進(jìn)后的T-形迷宮也可用來(lái)評(píng)價(jià)參考記憶(reference memory),即記錄在這一實(shí)驗(yàn)中一天、一次的測(cè)試都有用的信息。
T迷宮是檢測(cè)嚙齒類動(dòng)物空間工作記憶的一種經(jīng)典行為學(xué)方法,與前額葉皮層功能相關(guān)。小鼠節(jié)食至原體重85%。
(2)實(shí)驗(yàn)設(shè)備: 迷宮由兩個(gè)長(zhǎng)46cm、寬10cm、高10cm的目標(biāo)臂(goal arms)和一個(gè)與之垂直的長(zhǎng)71cm、同樣寬度和高度的主干臂(stem)或起始臂(approach alley)組成。主干臂內(nèi)置一個(gè)16cm×16cm的起始箱,并有一閘門(mén)與主干臂的另一部分相聯(lián)。飲水不限,但進(jìn)食控制在每天 16-20g,以使體重保持在非進(jìn)食大鼠體重的85%。在整個(gè)訓(xùn)練和測(cè)試期間,大鼠體重每周增加不超過(guò)5g。
(3)實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
①訓(xùn)練前2 d,撫摸小鼠并將其放入T迷宮適應(yīng)10min,在迷宮兩臂碗里放入食物,待小鼠取食完畢后將其取出。
②訓(xùn)練實(shí)驗(yàn):每一個(gè)trial包括兩個(gè)部分,即forced run和test run。forced run:選擇T迷宮的一臂,用木閘門(mén)將之關(guān)閉,小鼠只能進(jìn)入一臂獲取食物。取食完畢,立即取出,用酒精清洗去除氣味。15 s后,撤去的閘門(mén)。Test run:兩臂全部打開(kāi),將小鼠放入開(kāi)始臂中,若小鼠選擇未曾進(jìn)入的臂,為正確選擇,給予食物獎(jiǎng)勵(lì);若重復(fù)進(jìn)入相同的臂,則為錯(cuò)誤選擇,不給予食物。每只動(dòng)物每天進(jìn)行4個(gè)trial,每次間隔15min,連續(xù)4 d,分別計(jì)算每天每組小鼠的正確率。當(dāng)平均正確率都達(dá)到85%以上,訓(xùn)練階段結(jié)束。
③測(cè)試實(shí)驗(yàn):延長(zhǎng)forced run和test run之間的時(shí)間間隔至1min和3min,分別計(jì)算每組小鼠的正確率。
(4) 注意事項(xiàng):
①大鼠和小鼠具有良好的空間辨別功能,能很快學(xué)會(huì)并準(zhǔn)確操作迷宮。因此,T-形迷宮和放射臂迷宮均被廣泛用于測(cè)試動(dòng)物的空間記憶能力。T-形迷宮用于研究不同腦區(qū)對(duì)空間記憶的影響。它對(duì)某些腦結(jié)構(gòu),尤其是海馬的毀損作用敏感。此外,許多藥物或毒素都可增強(qiáng)或削弱動(dòng)物在T-形迷宮的空間記憶。實(shí)驗(yàn)所用的動(dòng)物除大鼠和小鼠外,還包括豬、羊、烏龜?shù)取?/span>
②動(dòng)物選擇的準(zhǔn)確性與兩次選擇之間的間隔及每一訓(xùn)練間期內(nèi)的選擇訓(xùn)練次數(shù)等有關(guān)。正常動(dòng)物經(jīng)短時(shí)間的間隔(例如5s),其選擇準(zhǔn)確性非常高。而經(jīng)過(guò)極長(zhǎng)時(shí)間的間隔(例如超過(guò)1h),其選擇接近隨機(jī)性操作。強(qiáng)迫選擇訓(xùn)練后。如只給一次目標(biāo)臂選擇,準(zhǔn)確性通常很高。但是,如給予多次選擇,則選擇次數(shù)越多,準(zhǔn)確性越差。
③嚙齒類動(dòng)物有單向偏愛(ài)的特性。這種單向偏愛(ài)與動(dòng)物種屬和品系有關(guān)。例如,C57BL/6J小鼠、ICR小鼠和Purdue-Wistar大鼠更偏愛(ài)左側(cè),而Spague-Dawley大鼠和Wistar大鼠更偏愛(ài)右側(cè)。研究表明,超過(guò)2/3的雄性Spague-Dawley大鼠偏愛(ài)右側(cè),而偏愛(ài)左側(cè)的不到1/5。這種單向偏愛(ài)可影響對(duì)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶的評(píng)價(jià)。
④主干臂的閘門(mén)是T-形迷宮的重要特征。它既可用于在兩次選擇之間將動(dòng)物限制在起始箱內(nèi)的時(shí)間,也可防止動(dòng)物在兩次選擇訓(xùn)練之間探究迷宮。因此,兩次選擇訓(xùn)練之間應(yīng)將動(dòng)物迅速放回主干臂內(nèi)的起始箱。這一點(diǎn)很重要,它可動(dòng)物不會(huì)去探究對(duì)側(cè)目標(biāo)臂。
⑤當(dāng)動(dòng)物對(duì)迷宮或?qū)嶒?yàn)者的應(yīng)激恐懼超過(guò)其對(duì)探究和覓食的渴望程度時(shí),動(dòng)物對(duì)迷宮的探究減少,甚至呆在迷宮某處不動(dòng)而不去探究迷宮。這種恐懼表現(xiàn)為 動(dòng)物在迷宮內(nèi)排便和排尿;當(dāng)抓它時(shí),動(dòng)物還會(huì)發(fā)出尖叫聲。因此,足夠的應(yīng)激適應(yīng)是的。否則,如果動(dòng)物在迷宮內(nèi)不進(jìn)行臂的選擇,就無(wú)從得知它的記憶力是 正常還是減弱。