技術(shù)文章
Technical articles(1)復(fù)制方法 采用經(jīng)額蛛網(wǎng)膜下腔插管直達大腦動脈(Willis)環(huán)處2次注血制成大白鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后DCV模型。
健康大鼠,體重為200~250g,雌雄不拘,經(jīng)腹腔注射水合氯醛(按350~400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(按50~60mg/kg體重的劑量)麻醉大鼠,剃除頭頂部毛發(fā),手術(shù)區(qū)域皮膚消毒。切開頭頂部中線皮膚,鈍性分離肌肉及骨膜。距前囟前5mm、中線旁3mm處用電動牙科鉆鉆孔達腦膜,此骨孔恰好在前顱窩底與額極交接處。適當(dāng)擴大骨孔,在手術(shù)顯微鏡下小心挑破腦膜,當(dāng)清亮腦脊液流出時將PC-10塑料管指向雙耳連線中點、緊貼前顱底蛛網(wǎng)膜下腔送入,深度8~10mm(經(jīng)解剖測量此長度導(dǎo)管頂端恰位于大腦動脈(Willis)環(huán)前部),連接注射器回抽有清亮腦脊液而無血液,提示穿刺成功。用骨蠟封閉骨創(chuàng)口,縫合肌肉并固定穿刺管。再于距前囟后3mm、中線旁3mm處左或右鉆一骨孔,挑破腦膜,插入測量電極于皮層內(nèi)(深度1mm),用于局部腦血流(rCBF)的測定。
斷尾取自體血150μl經(jīng)PC-10管緩慢注入蛛網(wǎng)膜下腔后,灼封塑料管并縫合皮膚。24h后同上述麻醉固定,剪開塑封管,再次注入自體血100μl。于末次注血6h后用生理
鹽水灌冼,4%多聚甲醛灌注固定,先快后慢,斷頭取腦,行大體及形態(tài)學(xué)觀察。也可于末次注血6h后先進行腦血管造影以觀察全腦血管痙攣情況。方法:麻醉后切開頸部皮膚,分離頸總動脈,經(jīng)頸內(nèi)動脈插管至顱底,注入60%泛影葡胺1ml進行全腦造影。
(2)模型特點 rCBF測定顯示局部血流量明顯降低。大體觀察可見大量血液積聚于大腦動脈(Willis)環(huán)處,大腦前中動脈、基底動脈均被陳舊性血凝塊包裹,前顱窩底、蝶鞍及后顱窩處均有陳舊性血凝塊殘留。微血管形態(tài)學(xué)觀察可見微血管管徑縮小。圖像分析可見血管總面積、血管數(shù)及平均血管面積均明顯降低。
(3)比較醫(yī)學(xué) 目前對DCV產(chǎn)生的機制有諸多觀點,但多傾向于是一種功能改變而非結(jié)構(gòu)改變。由于進行灌注固定時灌注壓、pH值、理化因素等對大動脈的影響,觀察大動脈的病變并不能真實地反映DCV的改變。以微血管的改變來反映DCV比大腦動脈環(huán)周圍大血管的改變來反映更可靠。經(jīng)小腦幕上蛛網(wǎng)膜下腔直達大腦動脈環(huán)周圍的直接注血法更加真實地模擬了SAH的病理過程,且操作簡單,出血易于控制,是一個較為可靠的SAH模型。由于該模型可重復(fù)性好,適用于DCV的研究。