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Timm染色實(shí)驗(yàn)用于鋅離子組織化學(xué)定位的方法銀染法(neo-Timm)硫化銀法,neo-Timm法是對離子狀態(tài)、 疏松結(jié)合或螯合狀態(tài)下的鋅離子染色,便于光、電鏡的觀察.
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用于鋅離子組織化學(xué)定位的方法銀染法(neo-Timm)硫化銀法,neo-Timm法是對離子狀態(tài)、 疏松結(jié)合或螯合狀態(tài)下的鋅離子染色,便于光、電鏡的觀察.
Timm染色方法是一種能夠顯示組織細(xì)胞內(nèi)重金屬分布的常用方法。苔蘚纖維末端是腦內(nèi)含鋅量高的區(qū)域,因此可以用此方法顯示苔蘚纖維末梢分布的情況。
Timm組織化學(xué)染色(Timm染色實(shí)驗(yàn)):
1. 切片貼附于多聚賴氨酸處理過的載玻片上。(-20°保存)
2. 做的時(shí)候拿出來晾干(10分鐘)。
3. 把Timm顯影劑倒入修復(fù)盒中,放在在26℃的水浴箱或恒溫?fù)u床里染色90-150min,染色在避光的條件下進(jìn)行。
4. 染色后,切片用蒸餾水沖洗幾遍,可以尼式染色復(fù)染,也可不復(fù)染。
5. 晾干,中性樹脂封膠片。
Timm液的配置:
A:防護(hù)膠:30g阿拉伯膠攪拌溶解于60ml去離子水中(充分?jǐn)噭蛉芙猓lo置兩天,如果有雜質(zhì)可用雙層紗布濾過。膠不急用的話冷凍保存在塑料瓶里可以保存至少6個(gè)月。
B:枸櫞酸緩沖液:2.55枸櫞酸•H2O加2.35枸櫞酸鈉•2H2O,加去離子水至10ml。
C:還原劑:0.85g對苯二酚(氫醌)溶于15ml的去離子水。
D:銀離子供應(yīng):0.11g乳酸銀(硝酸銀)加入15ml的去離子水。乳酸銀對光高敏感,因此此溶液應(yīng)當(dāng)避光。
A B C溶液小心混合,D溶液在用之前立即加入。一次做八到十張片子比較合適。
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圖片,結(jié)果及分析
實(shí)驗(yàn)周期:3-4周